三氧化二砷聚乙二醇-聚乳酸偶联人源抗血管内皮细胞生长因子受体2隐形纳米粒的抗肝癌机制探讨

摘要：目的：探讨以聚乙二醇-聚乳酸（ PEG-PLA）为载体材料包载的三氧化二砷（ As2 O3），同时偶联人源抗血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR-2）的隐形纳米粒的抗肝癌机制。方法以PEG-PLA为载体材料， W／O／W型超声乳化制备 As2 O3纳米粒，同时偶联具有肝癌靶向作用的VEGFR-2，得到人源抗VEGFR-2／As2 O3-PEG-PLA纳米粒，同时以相同方法制作香豆素6（ C6）-PEG-PLA及抗VEGFR-2／C6-PEG-PLA纳米粒。测定纳米粒粒径分布、 Zata电位； MTT法计算As2 O3、 As2 O3-PEG-PLA及抗VEGFR-2／As2 O3-PEG-PLA对Bel 7402肝癌细胞IC50值；采用流式细胞实验和激光共聚焦显微镜实验检测人肝癌 Bel 7402细胞摄取 C6-PEG-PLA及抗VEGFR-2／C6-PEG-PLA纳米粒的速度和强度；将18只肝癌裸鼠采用随机数字表法分为3组，每组分别经尾静脉注射As2 O3、 As2 O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2／As2 O3-PEG-PLA溶液，给药后12 h处死小鼠，取肿瘤、脾、心、肺、肝、肾等组织，测试其中As2 O3浓度；再将另24只肝癌裸鼠采用随机数字表法分为4组，每组分别经尾静脉注射As2 O3、 As2 O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2／As2 O3-PEG-PLA及0.9％氯化钠溶液，给药后第17 d，处死小鼠，计算肿瘤抑制率。结果抗VEGFR-2／As2O3-PEG-PLA平均粒径为（141.9±13.2） nm （PDI＝0.23），呈正态分布， Zata电位为（10.2±1.1） mV。 As2O3、 As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2／As2O3-PEG-PLA的 IC50值分别为（1.53±0.22）μmol／L，（2.30±0.18）μmol／L和（1.80±0.22）μmol／L。不同剂型IC50值比较，差异有统计学意义（F＝4.503， P＝0.018）。不同时间点人肝癌Bel 7402细胞摄取抗VEGFR-2／C6-PEG-PLA的速度均高于C6-PEG-PLA，差异有统计学意义（t＝2.012， P＝0.045； t＝2.231， P＝0.035； t＝2.311， P＝0.022）。 As2O3组不同组织As2O3含量比较，差异有统计学意义（F＝5.568， P＝0.018）； As2O3-PEG-PLA组不同组织As2O3含量比较，差异有统计学意义（F＝4.659， P＝0.034）；抗VEGFR-2／As2O3-PEG-PLA组不同组织As2O3含量比较，差异有统计学意义（F＝5.001， P＝0.022）。对照组、 As2 O3组、 As2 O3-PEG-PLA组和抗VEGFR-2／As2 O3-PEG-PLA组肿瘤抑制率分别为32.6％、45.9％、66.2％和87.9％。4组肿瘤抑制率比较，差异有统计学意义（χ2＝4.189， P＝0.018）。结论以PEG-PLA为载体材料制备得到As2 O3纳米制剂，且偶联具有肝癌靶向作用的VEGFR-2，用于肝癌的治疗，可显著提高As2 O3的生物利用度，为构建As2 O3肝癌靶向纳米递送系统提供了理论依据。