肺结核患者髓源性抑制细胞水平变化及其对T淋巴细胞增殖的影响研究

摘要：目的：探讨治疗前后肺结核（PTB）患者髓源性抑制细胞（MDSC）水平变化，分析 MDSC 对 T 淋巴细胞增殖的影响及其作用机制。方法选取2011年1月—2014年1月于临沂市人民医院诊断为活动性 PTB 患者30例，痰液涂片镜检结核分枝杆菌（MTB）阳性和结核菌素皮肤试验阳性（ TST +）的活动性 PTB 患者家属（接触 PTB 患者）12例，同期经本院结核内科检查为非结核病的健康对照者15例，同期本院痰液涂片镜检 MTB 阴性的肺部感染疾病患者7例。活动性 PTB 患者和接触 PTB 患者给予6个月的抗 PTB 治疗。取活动性 PTB 患者、接触 PTB 患者和健康对照者外周血制备单核细胞（ PBMC），取活动性 PTB 患者和肺部感染疾病患者肺部灌洗液制备支气管肺泡细胞（BALC），采用流式细胞仪进行流式分选，记录 MDSC 在 PBMC 和 BALC 中的比例。同样方法对治疗结束的活动性 PTB患者、治愈 PTB 患者和康复 PTB 患者检测 MDSC 在 PBMC 中的比例。从健康对照者分离的 PBMC 用 CFSE 活细胞荧光染色剂染色（CFSE - PBMC），从活动性 PTB 患者的 PBMC 中分离 CD +11b CD -14 MDSC，将不含 MDSC 的 PBMC 经丝裂霉素C 作用后培养。以2×105个 CFSE - PBMC 为反应细胞，2×105个不含 MDSC 的 PBMC 和 MDSC 以不同比例（1：0、1：2、1：4、1：8）混合作为刺激细胞共培养，测定 CD +3 T 淋巴细胞的 CFSE 信号强度。检测活动性 PTB 患者和健康对照者血清 L -精氨酸、一氧化氮（ NO）、鸟氨酸水平。结果活动性 PTB 患者、接触 PTB 患者、健康对照者 PBMC 中MDSC 比例分别为0.338（0.274，0.399）、0.115（0.073，0.201）和0.042（0.031，0.103），差异有统计学意义（H=16.450，P <0.001）；其中活动性 PTB 患者 PBMC 中 MDSC 比例高于接触 PTB 患者、健康对照者（P <0.001）。活动性 PTB 患者 BALC 中 MDSC 比例为0.425（0.219，0.483），高于肺部感染疾病患者的0.031（0.011，0.100）（ Z=9.675，P =0.004）。PBMC 与 MDSC 分别以1：0、1：2、1：4、1：8混合后，CD +3 T 淋巴细胞增殖率分别为0.874（0.761，0.953）、0.668（0.588，0.818）、0.510（0.477，0.614）、0.186（0.112，0.290），差异有统计学意义（H=9.995，P =0.006）。活动性 PTB 患者血清 L -精氨酸水平为31.72（18.37，59.58）μmol/ L，低于健康对照者的57.88（35.11，77.93）μmol/ L（Z =9.030，P =0.008）。活动性 PTB 患者血清 NO 水平为63.54（51.83，81.33）μmol/ L，高于健康对照者的30.31（28.19，40.28）μmol/ L（ Z =10.033，P =0.004）。治疗结束时治愈 PTB 患者PBMC 中 MDSC 比例为0.024（0.008，0.0389），低于活动性 PTB 患者治疗期间 PBMC 中 MDSC 的比例0.323（0.264，0.388）（Z =18.880，P <0.001）。康复 PTB 患者 PBMC 中 MDSC 比例为0.034（0.018，0.039），低于其治疗结束时PBMC 中 MDSC 的比例0.053（0.017，0.084）（Z =11.125，P =0.004）。结论活动性 PTB 患者 PBMC 和 BALC 中MDSC 比例增加，治愈及康复者 MDSC 比例下降；MDSC 可抑制 T 淋巴细胞增殖，其机制可能与激活 NO 信号通路有关。