乙型肝炎病毒X蛋白相关微小RNA差异表达在乙型肝炎病毒复制中的作用研究

摘要：背景乙型肝炎病毒 X 蛋白（HBX）在乙型肝炎病毒复制及肝癌形成中扮演着重要的角色。研究 HBX相关微小 RNA（miRNAs）的差异表达有可能为调控乙型肝炎病毒复制、阐明肝癌发展进程及开展预后干预提供重要信息。目的探讨肝癌细胞中 HBX 相关 miRNAs 的差异表达及其在乙型肝炎病毒复制中的作用。方法选取2014年1—10月第二军医大学附属东方肝胆外科医院收治的13例肝癌患者的肝癌组织及距离肝癌组织＞2 cm 癌旁组织的新鲜石蜡包埋标本，采用微阵列技术分析 HBX 相关 miRNAs 的差异表达，实时荧光定量反转录聚合酶链式反应（RT-qPCR）法定量分析肝癌组织与癌旁组织中7个与肝脏功能相关的 miRNAs 及 HBX mRNA 表达水平，同时分析过表达 hsa - miR -373或抑制 hsa - miR -22对乙型肝炎病毒复制的影响。结果微阵列技术分析显示，HepG2- X 细胞系和 HepG2- CAT 细胞系中有46种 miRNAs 差异表达，与 HepG2- CAT 细胞系相比，HepG2- X 细胞系中20种 miRNAs表达上调，26种 miRNAs 表达下调。肝癌组织与癌旁组织中 hsa - miR -22、hsa - miR -373、hsa - miR -92、hsa - miR-155及 HBX mRNA 表达水平比较，差异均有统计学意义（P ＜0.05）；肝癌组织与癌旁组织中 hsa - miR -181a、hsa- miR -34a、hsa - let -7i 表达水平比较，差异均无统计学意义（P ＞0.05）。Pearson 相关性分析结果显示，hsa - miR-22表达水平与 HBX mRNA 表达水平呈正相关（r =0.415，P =0.018），hsa - miR -373、hsa - miR -92、hsa - miR -155表达水平与 HBX mRNA 表达水平呈负相关（ r =-0.322，P =0.043；r =-0.369，P =0.028；r =-0.426，P=0.016）；hsa - miR -181a、hsa - miR -34a、hsa - let -7i 表达水平与 HBX mRNA 表达水平无直线相关关系（ r=0.076，P =0.363；r =0.017，P =0.676；r =0.122，P =0.242）。第2天和第3天 hsa - miR -22抑制剂组、hsa -miR -373前体组 HepG2.2.15细胞系及 HepAD -38细胞系乙型肝炎病毒拷贝数较阴性对照组降低（P ＜0.05）；第2天和第3天 hsa - miR -373前体组 HepG2.2.15细胞系乙型肝炎病毒拷贝数较 hsa - miR -22抑制剂组降低（P ＜0.05）。第2天 hsa - miR -373前体组 HepAD -38细胞系乙型肝炎病毒拷贝数较 hsa - miR -22抑制剂组升高，第3天 hsa - miR-373前体组 HepAD -38细胞系乙型肝炎病毒拷贝数较 hsa - miR -22抑制剂组降低（P ＜0.05）。第2天和第3天 hsa- miR -373前体组 HepG 2.2.15细胞系乙型肝炎病毒拷贝抑制率较 hsa - miR -22抑制剂组升高（P ＜0.05）。第2天hsa - miR -373前体组 HepAD -38细胞系乙型肝炎病毒拷贝抑制率较 hsa - miR -22抑制剂组降低，第3天 hsa - miR -373前体组 HepAD -38细胞系乙型肝炎病毒拷贝抑制率较 hsa - miR -22抑制剂组升高（P ＜0.05）。结论 HBX 相关miRNAs 的差异表达可通过靶向相关信号转导通路影响乙型肝炎病毒在肝癌细胞内的复制。