Apelin 对单侧输尿管结扎小鼠肾脏纤维化的影响研究

摘要：目的：探讨生物活性肽Apelin对单侧输尿管结扎（ UUO）小鼠肾脏纤维化的影响及相关机制，分析在肾脏纤维化时血清和肾脏局部Apelin／APJ系统的代偿性变化。方法2014年1月选取7周龄雄性C57Bl／6j小鼠共60只，构建UUO的小鼠模型，并设立假手术组（ Sham）作为对照。术后每天给小鼠腹腔注射Apelin－13（0.1μmol／kg）或等量0.9％氯化钠溶液（ vehicle ）。根据小鼠手术方式和术后用药情况分为4组（15只／组）： Sham ＋vehicle组、Sham ＋Apelin组、 UUO ＋vehicle组、 UUO ＋Apelin组。术后2周将小鼠处死，取手术侧肾脏进行检测。采用Masson染色观察肾脏纤维化程度；采用实时荧光定量 PCR （ RT-PCR ）法检测肾脏细胞外基质胶原〔纤维连接蛋白（Fibronectin）、Ⅰ型胶原（Collagen I）、Ⅲ型胶原（Collagen Ⅲ）〕表达水平以及肾脏Apelin、 APJ表达水平；采用Western blotting法检测肾小管上皮细胞标志物上皮细胞钙黏蛋白（ E－cadherin）、间充质细胞标志物α平滑肌肌动蛋白（α－SMA）表达水平以及转化生长因子β（ TGF-β）／Smads 信号通路的主要信号分子（ TGF-β1、 TGF-βR1、p－Smad2）表达水平；采用ELISA法检测小鼠血清Apelin表达水平。结果4组小鼠肾脏纤维化程度比较，差异有统计学意义（ P ＜0.05）。 UUO ＋vehicle组和 UUO ＋Apelin组小鼠肾脏纤维化程度均高于 Sham ＋vehicle组和 Sham＋Apelin组（ P＜0.05）； UUO ＋Apelin组小鼠肾脏纤维化程度低于 UUO ＋vehicle组（ P ＜0.05）。4组小鼠肾脏Fibronectin、 CollagenⅠ、 Collagen Ⅲ表达水平比较，差异均有统计学意义（ P ＜0.05）。 UUO ＋vehicle组和 UUO＋Apelin组小鼠肾脏 Fibronectin、 CollagenⅠ、 Collagen Ⅲ表达水平高于 Sham ＋vehicle组和 Sham ＋Apelin组（ P ＜0.05）； UUO ＋Apelin组小鼠肾脏Fibronectin、 CollagenⅠ、 CollagenⅢ表达水平低于UUO ＋vehicle组（ P＜0.05）。4组小鼠肾脏E－cadherin、α－SMA表达水平比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）。 UUO ＋vehicle组和UUO ＋Apelin组小鼠肾脏E－cadherin表达水平低于Sham ＋vehicle组和Sham ＋Apelin组，α－SMA表达水平高于Sham ＋vehicle组和Sham ＋Apelin组（ P＜0.05）； UUO ＋Apelin组小鼠肾脏E－cadherin表达水平高于UUO ＋vehicle组，α－SMA表达水平低于UUO ＋vehicle组（ P＜0.05）。4组小鼠肾脏TGF-β1、 TGF-βR1、 p－Smad2表达水平比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）。 UUO ＋vehicle组和 UUO ＋Apelin组小鼠肾脏 TGF-β1、 TGF-βR1、 p －Smad2表达水平均高于 Sham＋vehicle组和Sham ＋Apelin组（ P＜0.05）； UUO ＋Apelin组小鼠肾脏TGF-β1、 TGF-βR1、 p－Smad2表达水平均低于UUO ＋vehicle组（ P＜0.05）。4组小鼠肾脏Apelin表达水平比较，差异无统计学意义（ P＞0.05）；4组小鼠肾脏APJ、血清Apelin表达水平比较，差异有统计学意义（ P＜0.05）。 UUO ＋vehicle组和UUO ＋Apelin组小鼠肾脏APJ表达水平高于Sham ＋vehicle组和Sham ＋Apelin组，血清Apelin表达水平低于Sham ＋vehicle组和Sham ＋Apelin组（ P＜0.05）；UUO ＋Apelin组小鼠肾脏APJ表达水平低于UUO ＋vehicle组，血清Apelin表达水平高于UUO ＋vehicle组（ P＜0.05）。结论 Apelin通过干扰经典的TGF-β／Smads信号通路抑制UUO小鼠肾脏的肾小管上皮－间充质转分化，进而减轻肾脏纤维化。在肾脏纤维化时，小鼠血清Apelin表达水平降低，肾脏APJ表达水平升高，可能对慢性肾脏病的进展起到一定的代偿作用。