黄芩素和LY294002对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响研究

摘要：目的：探讨黄芩素和LY294002对人肝癌细胞系SMMC―7721细胞增殖和凋亡的影响。方法2015年3月—2016年1月，取人肝癌细胞系SMMC―7721，制备细胞悬液。加入黄芩素（1、2、5、10、20、50、100、200、300μmol/L，分别命名为A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9组）或LY294002（1、2、5、10、20、30μmol/L，分别命名为B1、B2、B3、B4、B5、B6组），设定空白对照组和二甲基亚砜（ DMSO）对照组，采用CCK8试剂盒检测各组细胞增殖水平；采用20μmol/L黄芩素（ C1组）单独处理，20μmol/L黄芩素联合10μmol/L LY294002（ C2组）处理人肝癌细胞系SMMC―7721，设定空白对照组和DMSO组，采用流式细胞术检测各组细胞周期；采用2、5、10、20μmol/L黄芩素（分别命名为D1、D2、D3、D4组）处理人肝癌细胞系SMMC―7721，设定空白对照组和DMSO组，采用显微摄影检测各组细胞数量；采用20μmol/L 黄芩素（ E1组）单独处理，20μmol/L 黄芩素联合10μmol/L LY294002（E2组）处理人肝癌细胞系SMMC―7721，设定空白对照组和DMSO组，采用流式细胞术检测各组早期凋亡和晚期凋亡情况；采用20μmol/L黄芩素（ F1组）、10μmol/L LY294002（ F2组）或20μmol/L黄芩素联合10μmol/L LY294002（F3组）处理人肝癌细胞系SMMC―7721，设定空白对照组和DMSO组，采用实时荧光定量PCR（Real―time PCR）法检测细胞外调节蛋白激酶（ERK）1/2、周期素D1（CyclinD1）、糖原合成酶激酶―3β（GSK―3β）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（ AKT）mRNA表达水平；采用20μmol/L黄芩素（ G1组）、10μmol/L LY294002（ G2组）或20μmol/L黄芩素联合10μmol/L LY294002（ G3组）处理人肝癌细胞系SMMC―7721，设定空白对照组和DMSO组，采用Western blotting法检测磷酸化ERK1/2（ P―ERK1/2）、CyclinD1、磷酸化GSK―3β（ P-GSK―3β）、磷酸化AKT （ P―AKT）表达水平。结果 A8组、A9组、B6组细胞增殖水平低于空白对照组、DMSO对照组（ p〈0.05）。C2组G0/G1期、G2/M期细胞比例高于空白对照组、DMSO组，S期细胞比例低于空白对照组、DMSO组（p〈0.05）。D4组细胞数量少于空白对照组、DMSO组（p〈0.05）。空白对照组、DMSO组、E1组、E2组早期凋亡和晚期凋亡比较，差异无统计学意义（ p〉0.05）。F3组ERK1/2、CyclinD1、GSK―3β、AKT mRNA表达水平均低于空白对照组、DMSO组（p〈0.05）。G3组P―ERK1/2、CyclinD1、P-GSK―3β、P―AKT表达水平低于空白对照组、DMSO组（p〈0.05）。结论黄芩素和LY294002可抑制人肝癌细胞系SMMC―7721细胞增殖，但不影响其凋亡。